在开发特定细胞系的培养条件时，需要考虑许多参数。我们都知道pH平衡，氧气水平和血清浓度是导致培养成功或失败的重要变量。然而，包括与细胞需要相匹配的解离方法的亚培养方案同样重要。考虑到这一点，我们将审查一些常见的解离实践背后的原理，以帮助您根据细胞系的特定性质定制您的方法。
悬浮生长的细胞易于亚培养。只要将细胞稀释到合适的新鲜培养基中，然后用完它们的营养供应，它们就会很好。另一方面，以单层生长的细胞彼此之间以及与培养皿发生蛋白质接触。必须先打破这些细胞，然后将细胞悬浮在培养基中，旋转并重新铺板。因此，必须特别考虑确保解离条件破坏细胞接触而不杀死细胞。
在决定解离条件时，研究者应考虑细胞产生的键的类型。一些贴壁细胞系仅产生微弱的接触，可以通过简单地将培养瓶撞击在您的手掌上，或通过将烧瓶轻敲在台面上来破坏。其他贴壁细胞系，特别是来自上皮细胞的贴壁细胞系，可形成强大的多蛋白质紧密连接，只能通过酶消化破坏; 在这些情况下，经常使用胰蛋白酶（丝氨酸蛋白酶）。来自上皮的细胞也可以表达钙粘蛋白，其介导非常强的钙依赖性粘附物或桥粒连接。在这种情况下，可能需要添加钙螯合剂（如EDTA）来螯合钙，以有效地解离细胞。
为了在解离后优化细胞活力，反应条件应与细胞接触的强度相匹配。例如，如果标准胰蛋白酶/ EDTA消化（通常0.05％-0.5％）不能有效消化细胞键（在10-15分钟内），则可能难以在细胞开始死亡之前从细胞中除去细胞，并且细胞活力将受到不利影响。在这种情况下，可能需要更高浓度的胰蛋白酶/ EDTA或其他酶，例如胶原酶。另一方面，如果反应太苛刻，细胞可能裂解或丢失重新附着到板上所需的表面蛋白质，并且任一情况都将导致活力降低。此外，裂解的细胞释放基因组DNA，导致活细胞结块，使存活细胞更难重新培养，并且需要添加DNase。
如果您已将反应强度与细胞系的粘附特性相匹配，但您的细胞仍难以去除，您可能会发现问题在于细胞准备解离的方式。在生长培养基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素，例如血清，但是这可以通过在添加解离试剂之前用Dulbecco's PBS（不含钙或镁）简单地冲洗细胞一次或两次来克服。也可能是细胞保持融合的时间过长。在这些条件下，细胞可能会形成特别强的细胞 - 细胞和细胞 - 表面连接，这些连接特别难以破碎。出于这个原因，以及培养物的整体健康状况，建议细胞在融合之前进行传代（即，
通过对解离试剂的工作原理的基本了解，研究人员可以开发出一种优化的方案，该方案同时考虑细胞粘附性的强度和质量。优化的细胞解离方案将确保成功的传代培养并延长培养细胞的寿命。
Carolyn Peluso博士是ATCC的技术作家和细胞生物学专家。
