海洋食品教育部工程研究中心
仪 器 设 备 日 常 使 用 与 维 护 规 程
1.仪器的使用
1.1用蒸馏水将制胶玻璃板和梳子冲洗干净,并用吹风机将水分吹干,用夹子封闭玻璃板边缘,在玻璃板支架上夹紧。
1.2根据欲分离蛋白质大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的凝胶; 1.3将配好的分离胶溶液迅速加入制胶板中(约6mL),距梳子下端1cm左右,并在**后加适量的饱和正丁醇;
1.4室温下60~90分钟后分离胶完全凝结,清除凝胶顶端残余的饱和正丁醇; 1.5配制浓缩胶溶液,并迅速加入制胶板中(约2mL),轻轻插入梳子,保证不气泡产生;
1.6室温下30-60分钟后浓缩胶完全凝结,小心拔出梳子,将凝胶板安放在
电泳槽内;
1.7向
电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶板顶端为宜,如样品孔内有气泡,应设法除去;
1.8用移液枪将处理好的样品(20L)慢加入被浸没的凝胶加样孔内;
1.9接通电源,红色为正极,黑色为负极,一般浓缩胶电压为80V,以浓缩胶和分离胶分割线为界,分离胶电压为120V,电泳2~3h即可;
1.10根据指示剂观察泳动的位置,判断是否终止电泳;
1.11电泳完毕,关上电源,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与蛋白质分子量标准Marker比较样品蛋白质大小。
2.维护与保养
2.1
电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到
电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电。
2.2仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
2.3由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳**终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
2.4在总电流不超过仪器额定电流时(**大电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命。
2.5某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏。
2.6使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故。