电泳依赖于基本过程 - 在电场中移动的粒子,或多或少。虽然已知200多年,这种现象仍然驱动许多实验室的基本技术。尽管有着悠久的历史,这一领域仍然围绕着时间。但是,不是几个世纪,研究人员现在专注于分钟。特别地,他们希望该过程花费更少的时间 - 更少。另一方面,每个人都希望更高的精确度和更低的检测限,都具有更高的吞吐量。
当被问及当前凝胶电泳的**大挑战时,Life Technologies(加利福尼亚州卡尔斯巴德)的**产品经理Nikita Warner快速说,“获得成果的时间。“她指出,凝胶上运行的核酸在约十年前从45分钟加速到30分钟,然后下降到仅10分钟。“使用实时可视化,您可以在看到乐队后立即停止运行,而且可以少于10分钟,”她说。
凝胶电泳的长期历史在该技术的广泛使用中发挥一些作用。明尼苏达大学化学工程和材料科学副教授Kevin Dorfman博士指出,用于DNA分离的凝胶电泳是“相当成熟的技术”。他说:“只要你的分离是足够好,你可以切出乐队。“这真的很简单,只需要拿一把手术刀,然后逐字切除感兴趣的乐队。然而,技术的进步可以改善这种形式的电泳。例如,Dorfman指出,用于凝胶的一些市售缓冲液不像传统的那样加热,并且加速了分离。
老和新
Life Technologies以色列业务和产品开发**经理Adam Sartiel说,虽然人们已经被编程为数字化观看这些天,但电泳仍然相当古老,因为它提供了必须转换为数字格式的模拟结果。 “即使平台提供了数字输出,用户仍然希望看到频段 - 数据的模拟版本。经验丰富的研究人员可能会发现模拟信息有帮助,特别是在任何故障排除中。
使用电泳的老学校实际上是在运行任何凝胶之前开始的。它从开始。“大多数人仍然使用手动方法准备凝胶,”Sartiel说,“这不是精确的,不是一个校准系统。
除了一致性,安全性也在制备凝胶中起作用。关于聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),华纳指出处理有毒化学品的危险。“用琼脂糖凝胶,”她补充说,“个人的危害不是很大。
因此,Life Technologies专家看到更多的人转向商业制备的凝胶。Warner说,除了为用户提供更一致,更安全的产品外,他们的凝胶还提供了更长的保质期。“当你为PAGE制作自己的凝胶时,它们**多只能持续几个小时,”她说。作为一个例子,她指出NuPAGE凝胶具有一年以上的保质期或更长。
旧技术的新用途
一些新技术增加了凝胶电泳的使用,而下一代测序提供了一个关键的例子。Sartiel说:“一些测序系统需要从凝胶中提取一定大小的文库,现在可以通过凝胶电泳快速自动完成。
电泳中的变化,例如毛细管电泳,也影响潜在的应用。正如Beckman Coulter(美国加利福尼亚州)毛细管电泳全球经理Mark Lies博士说:“分离形式可以控制毛细管内的环境,使您可以完全背对背分离不同类型的分子使用不同的测定。
根据Lies,毛细管电泳可以应用于解决许多问题。“它可以用于评估蛋白质的纯度和电荷异质性或分析与这些蛋白质相关的碳水化合物,”他说。还指出,毛细管电泳可用于分析样品中的离子群体或将对映异构体彼此分离。他补充说,“在生物制药行业中,毛细管电泳的应用非常广泛,可用于治疗性蛋白质的自动化定量表征。生物科技公司正在指望[毛细管电泳]技术,以帮助保持其开发和商业化的单克隆抗体治疗的质量控制。“他还认为这种技术用于石油化工,环境,食品和饮料,
如果研究人员想要定量精确地鉴定DNA混合物的组分,Dorfman建议使用毛细管电泳。另一方面,他提到研究人员可以建立凝胶电泳,投资小得多。
增强自动化
“毛细管电泳提供了自动化分析,因此用户变异性**小化,”Lies说。“此外,集成软件和电子技术控制提供精确的仪器控制,数据量化,以及符合法规要求的能力。
除了降低可变性的明显优点之外,自动化操作提供了方法开发能力,其中用户可以对仪器进行编程以改变分离条件。“集成软件可以让您控制仪器,”Lies解释说。例如,他说:“施加电压以产生场强和分离温度可能影响分离。
甚**可以在毛细管电泳平台的前端添加样品制备平台。“然后你获得了运行到运行的可重复性,因为在样品制备过程中也有**小的手动交互。
总体而言,毛细管电泳的增长能力为用户提供了更高的分离选择,具有高精度,准确性和稳定性。因此,该技术将开始应用于越来越多的领域中的更多类型的分析。此外,这个百年古老的概念和全新技术的组件的改进推动了这一领域的发展。