(一)蛋白质电泳
1.请参照常规电泳操作.
2.分子量标准:
可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:
优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.
缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力.
购买信息:
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中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)
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V5235S
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200μg
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国产
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80元
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分子量大小:（14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD）
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中范围蛋白质分子量标准(24-97KD)
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MTB087-1
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20次
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国产
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80元
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分子量大小:（24、36、53、66、97KD）
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低范围蛋白质分子量标准（6.5-66KD）
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M3913-1
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20次
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Sigma
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280元
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低范围蛋白质分子量标准（6.5-66KD）
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M3913-1
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5×20次
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Sigma
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1198元
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分子量大小:（6.5、20、24、29、36、45、66KD）
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高范围蛋白质分子量标准（36-205KD)
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M3788-1
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20次
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Sigma
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280元
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高范围蛋白质分子量标准（36-205KD)
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M3788-1
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5×20次
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Sigma
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1198元
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分子量大小:（36、45、55、66、84、97、116、205KD）
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宽范围蛋白质分子量标准（6.5-205KD)
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M4038-1
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20次
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Sigma
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280元
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宽范围蛋白质分子量标准（6.5-205KD)
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M4038-1
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5×20次
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Sigma
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1266元
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分子量大小:（6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD）
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预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD)
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20次
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自产
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320元
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预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD)
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50次
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自产
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680元
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分子量大小: 80, 60, 39, 23, 18 kDa
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预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD)
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20次
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自产
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320元
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预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD)
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50次
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自产
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680元
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分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa
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预染的中高范围蛋白质分子量标准(18.3-210KD)
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26681
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48次
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Pierce
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1214元
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a)膜的选择:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比较如下:
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NC膜
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PVDF膜
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物理强度
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差
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好
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蛋白质结合能力
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80-100ug/cm2
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100-200ug/cm2
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溶剂耐受力
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无
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有
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考马斯亮兰染色
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否
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可以
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ECL检测
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稍差
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可以
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快速免疫检测
|
否
|
可以
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SDS存在下蛋白质结合
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差
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好
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质谱分析
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否
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可以
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b)膜的大小: 请根据胶的面积来确定.
c)膜的孔径: 0.45μm适用一般蛋白质.0.2μm适用小分子蛋白质.
购买信息:
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66485
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硝酸纤维素膜,0.45um,30cmX3m/卷
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美国Gelman
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1395元/卷
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硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm
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美国Gelman
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80元/张
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硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm
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国产
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30元/张
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60207
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尼龙膜, 0.45um,30cmX3m/卷
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美国Gelman
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2310元/卷
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尼龙膜, 0.45um,20cmX15cm
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美国Gelman
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90元/张
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尼龙膜, 0.45um,直径100mm,50张/盒
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国产
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260元/盒
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66543
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PVDF膜, 0.45um,30cmX3m/卷
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美国Gelman
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1690元/卷
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PVDF膜, 0.45um, 直径100mm,50张/盒
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国产
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260元/盒
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蛋白质染色的染料有很多种,各种的特点均不一样.
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蛋白质灵敏度
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影响免疫检测
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Ponceau-S Red丽春红
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5ug
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无
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快绿Fc
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5ug
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无
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Sypro Rose
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1-2ng
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无
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氨基黑10B
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1ug
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有
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考马斯亮兰R-250
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500ng
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有
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印度墨
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100ng
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有
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胶体金
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4ng
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有
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Ponceau-S Red丽春红
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Sigma原装
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10g
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182元
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快绿Fc
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Amresco分装
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25g
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258元
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氨基黑10B
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Sigma分装
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10g
|
168元
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考马斯亮兰R-250
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Amresco分装
|
10g
|
168元
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蛋白银染试剂盒
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自产MTB083-1
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10次
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188元
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SDS-PAGE蛋白快速染色试剂
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自产
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25次
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100元
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Western Blot 膜可逆染色剂
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自产
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100ml
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100元
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有各种不同的免疫检测方法.请注意选择.方法不同,则所需的试剂也不同.如需方便,可选择完整的试剂盒.
A.封闭膜:
这一步会影响结果的成败和背景的强度.常用封闭剂为BSA和Tween20.脱脂干奶粉不适合用于糖蛋白和生物素标记抗体.
购买信息:
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牛血清白蛋白组份五BSA
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Amresco分装
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25g
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280元
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Tween 20
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Amresco分装
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500ml
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150元
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Western Blot 膜封闭剂
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自产
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100ml
|
100元
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B.一抗: 根据目的蛋白质选择.单抗或多抗均可.注意已变性蛋白质无法检测,必须采用非变性胶电泳.我司有 R&D,Genex,Santa Cruz等公司的原装抗体或进口分装抗体.具体请参见免疫学部分产品----**抗体.
C.标记二抗: 根据一抗的来源选择二抗.
购买信息: 请参见免疫学部分试剂---各种标记抗体
D.底物系统: 采用常规底物或化学发光底物.
(1)显色法: 常用底物为BCIP/NBT或DAB .此法简单,但灵敏度不高,并难以从膜上去除.
(2)化学发光法: 目前比较常用的方法.灵敏度较高,检测时可采用X光胶片或CCD成像系统.
不同显色方法产品比较如下:
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厂家
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灵敏度
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方法
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SuperSignalâ West Pico 化学发光底物
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美国Pierce
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皮克级
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化学发光法
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SuperSignalâ West Dura 持久性化学发光底物
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美国Pierce
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低飞克级
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化学发光法
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SuperSignalâ West Femto 高灵敏度化学发光底物
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美国Pierce
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飞克级
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化学发光法
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ECL Kit
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Amersham
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飞克级
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化学发光法
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BCIP/NBT (AP酶)
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100pg
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显色法
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DAB (HRP酶)
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100pg
|
显色法
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SuperECL Plus Western Blotting 超敏发光液
采用独特的发光底物系统，是世界上**灵敏的ECL Western Blot 化学发光试剂。用于Western Blotting 条带的荧光发光，检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP 的抗体及其关联的抗原。由两种溶液组成，使用前混合。SuperECL Plus 超敏发光液，价格低廉，灵敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同类ECL 产品100 倍以上，也明显高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化学发光系统数倍，但背景更干净，发光时间持久，可以长达10 小时以上。
特别适用于丰度极低而一般ECL 系统难于检测的目的蛋白。
特点如下：
ж 灵敏度极高，可检测10-100 fg 抗原。
ж 高信噪比，背境干净。
ж 发光迅速。
ж 发光持续12小时以上。
ж 可在日光灯下进行发光操作。
ж 节省抗体(一抗1:2000－1:6000；二抗1:4000－1:10000)。
ж 储存条件：4℃避光储存一年，偶尔室温放置数周不影响质量。
购买信息
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产品名称
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规格
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编号
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价格
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SuperECL Plus Western Blotting 超敏发光液
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10ml
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P1010-10
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138
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25ml
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P1010-25
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266
|
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100ml
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P1010-100
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880
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美国Pierce公司化 学 发 光 底 物 系 列
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SuperSignalâ 底物家族提供一系列的底物，适合免疫印迹的多种灵敏度要求。
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SuperSignal@ West Pico 化学发光底物
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特征
优点
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经济：比任何其它化学发光底物产品花费更少。
更长发光时间：强光发射超过一个工作日，获得你想要曝光次数。
高强度：信号比其它基于发光胺的系统强两倍。
皮克级灵敏性：高度灵敏性可快速显色较宽水平范围内的蛋白质。
优良的稳定性：24小时工作溶液稳定性；在运输条件环境下**少可稳定1年。
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SuperSignal@ West Dura 持久性化学发光底物
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特征
优点
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24小时发光时间：比任何其它改良的HRP化学发光底物提供的要长10倍；为发表质量的印迹提供更多的曝光
极好的灵敏度：具**的10-15 克级灵敏度
节省抗体：使用Super Signal â West Dura 伸展持续期底物比用其它化学发光底物，抗体稀释度可高得多。
立即产生强烈信号，易被胶片或化学发光检测系统检测
工作浓度**少稳定24小时；试剂盒在运输条件下可稳定**少一年
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SuperSignal@ West Femto **高灵敏度化学发光底物
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特征
优点
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释放由化学发光系统产生的**强信号；使胶片或图象仪系统成像更容易达到可能检测蛋白质的**低限：10-15 克
经济：使宝贵的一抗稀释度可达1/100,000
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Lumi-PhosTM West Blotting 化学发光底物
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PIERCE 基于碱性磷酸酶检测系统的化学发光底物，其同时具有两个特色：高强度信号和较低的背景。
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定货信息
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目录号
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产品名称
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包装
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价格
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SuperSignalâ West Pico化学发光底物
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|||
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34080
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
|
500ml
|
2178
|
|
34077
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
|
100ml
|
647
|
|
34079
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
|
50ml
|
383
|
|
SuperSignalâ West Dura持久性化学发光底物
|
|||
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34075
|
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate
|
100ml
|
3643
|
|
37071
|
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
|
20ml
|
805
|
|
SuperSignalâ West Femto**高灵敏度化学发光底物
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34095
|
SuperSignal® West Femto Maximum Sensitivity Substrate
|
100ml
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3828
|
|
34094
|
SuperSignal® West Femto Maximum Substrate Trial kit
|
20ml
|
950
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4.Western Blotting检测试剂盒
我们开发了此步免疫检测的完整的试剂盒,即HRP标记的二抗检测系统(含封闭液,洗液,底物,HRP/亲和素-二抗),您只需准备好一抗,并选择和一抗动物来源相应的试剂盒就可以.对于实验来说,采用完整的试剂盒可以避免各种试剂的不匹比而带来的结果不理想.
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒
试剂盒的内容：
（1）封闭试剂：10g蛋白质干粉2包。
（2）浓缩抗体稀释液：20ml×2瓶，为10倍浓缩液。
（3）过氧化物酶标记二抗。1ml。效价1：200―400
（4）DAB浓缩液10ml(×40倍)
购买信息:
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Western Blotting DAB显色kit（大鼠IgG）
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SA2023
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国产
|
盒
|
550元
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Western Blotting DAB显色kit（山羊IgG）
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SA2021
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国产
|
盒
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550元
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Western Blotting DAB显色kit（兔IgG）
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SA2022
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国产
|
盒
|
550元
|
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Western Blotting DAB显色kit（小鼠IgG）
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SA2020
|
国产
|
盒
|
550元
|
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SuperSignal West Pico His蛋白Western检测试剂盒
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15168
|
Pierce
|
盒
|
3268元
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CL-Xposure X 光胶片(5”x7”)
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34090
|
Pierce
|
100张
|
1054元
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CL-Xposure X 光胶片(8”x10”)
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34091
|
Pierce
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100张
|
2121元
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|
柯达X 光胶片(5”x7”)
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合资
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100张
|
200元
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